Prošle sedmice smo podijelili nekoliko razmatranja o korištenju elektroforeze membranske membrane od celuloznog acetata, a danas ćemo završiti ovu temu za vašu referencu.
Izbor od Koncentracija pufera
Koncentracija pufera koja se koristi u elektroforezi celulozno acetatne membrane općenito je niža od one koja se koristi u elektroforezi papira.Uobičajeni pH 8,6Barbitalni pufer se obično bira u rasponu od 0,05 mol/L do 0,09 mol/L.Prilikom odabira koncentracije vrši se preliminarno određivanje.Na primjer, ako je dužina membranske trake između elektroda u komori za elektroforezu 8-10 cm, potreban je napon od 25 V po centimetru dužine membrane, a jačina struje bi trebala biti 0,4-0,5 mA po centimetru širine membrane.Ako se ove vrijednosti ne postignu ili prekorače tokom elektroforeze, koncentraciju pufera treba povećati ili razrijediti.
Preterano niska koncentracija pufera će rezultirati brzim pomeranjem traka i povećanjem širine trake.S druge strane, pretjerano visoka koncentracija pufera će usporiti migraciju pojasa, što otežava razlikovanje određenih pojaseva razdvajanja.
Treba napomenuti da se u elektroforezi celulozno acetatne membrane značajan dio struje provodi kroz uzorak, što stvara značajnu količinu topline.Ponekad se odabrana koncentracija pufera može smatrati prikladnom.Međutim, u uvjetima povećane temperature okoline ili kada se koristi veći napon, isparavanje vode uslijed topline može se intenzivirati, što rezultira pretjerano visokom koncentracijom pufera, pa čak i uzrokuje sušenje membrane.
Sample Volume
U elektroforezi sa celuloznom acetatnom membranom, količina zapremine uzorka određena je različitim faktorima, uključujući uslove elektroforeze, svojstva samog uzorka, metode bojenja i tehnike detekcije.Kao opći princip, što je osjetljivija metoda detekcije, to može biti manji volumen uzorka, što je povoljno za odvajanje.Ako je zapremina uzorka prevelika, obrasci elektroforetskog odvajanja možda neće biti jasni, a bojenje takođe može biti dugotrajno.Međutim, kada se kvantitativno analiziraju odvojene obojene trake korištenjem elucijskih kolorimetrijskih metoda detekcije, volumen uzorka ne bi trebao biti premali, jer može rezultirati nižim vrijednostima apsorpcije za određene komponente, što dovodi do većih grešaka u izračunavanju njihovog sadržaja.U takvim slučajevima, zapreminu uzorka treba na odgovarajući način povećati.
Tipično, volumen uzorka koji se dodaje na svaki centimetar linije za nanošenje uzorka kreće se od 0,1 do 5 μL, što je ekvivalentno količini uzorka od 5 do 1000 μg.Na primjer, u rutinskoj analizi elektroforeze proteina u serumu, volumen uzorka koji se dodaje na svaki centimetar linije za nanošenje općenito ne prelazi 1 μL, što je ekvivalentno 60 do 80 μg proteina.Međutim, kada se analiziraju lipoproteini ili glikoproteini koristeći istu metodu elektroforeze, potrebno je odgovarajuće povećati volumen uzorka.
U zaključku, najpogodniji volumen uzorka treba odabrati na osnovu specifičnih uslova kroz niz preliminarnih eksperimenata.
Odabir otopine za bojenje
Razdvojene trake u elektroforezi celulozno acetatne membrane obično se boje prije detekcije.Različite komponente uzorka zahtijevaju različite metode bojenja, a metode bojenja prikladne za elektroforezu celulozno acetatne membrane možda neće biti u potpunosti primjenjive na filter papir.
Postoje tri glavna principa za odabir rješenja za bojenjecelulozno acetatna membrana.prvo,Boje rastvorljive u vodi treba da imaju prednost u odnosu na boje rastvorljive u alkoholu kako bi se izbeglo skupljanje i deformacija membrane uzrokovana rastvorom za bojenje potonjeg.Nakon bojenja, važno je isprati membranu vodom i minimizirati trajanje bojenja.U suprotnom, membrana može postati uvijena ili skupljena, što bi uticalo na kasniju detekciju.
Drugo, poželjno je odabrati boje sa jakim afinitetom bojenja za uzorak.U elektroforezi serumskih proteina na celulozno-acetatnoj membrani, amino crni 10B se obično koristi zbog njegovog snažnog afiniteta prema različitim komponentama proteina seruma i njegove stabilnosti.
Treće, treba odabrati pouzdane kvalitetne boje.Neke boje, iako imaju isto ime, mogu sadržavati nečistoće koje rezultiraju posebno tamnom pozadinom nakon bojenja.Ovo čak može zamutiti izvorno dobro razdvojene trake, što ih čini teškim za razlikovanje.
Na kraju, važan je izbor koncentracije otopine za bojenje.Teoretski, moglo bi se činiti da bi veća koncentracija otopine za bojenje dovela do temeljitijeg bojenja komponenti uzorka i boljih rezultata bojenja.Međutim, to nije slučaj.Afinitet vezivanja između komponenti uzorka i boje ima određenu granicu, koja se ne povećava s povećanjem koncentracije otopine za bojenje.Naprotiv, pretjerano visoka koncentracija otopine za bojenje ne samo da gubi boju već i otežava postizanje jasne pozadine.Štaviše, kada intenzitet boje dostigne određenu maksimalnu vrijednost, kriva apsorpcije boje ne prati linearnu vezu, posebno u kvantitativnim mjerenjima. U elektroforezi sa celuloznim acetatom, koncentracija otopine za bojenje je općenito niža od one koja se koristi u elektroforezi papira.
Detalji koje trebate znati o biotehnologiji Peking Liuyi's celulozno acetatna membranarezervoar za elektroforezu i njegovu primjenu elektroforeze, posjetite ovdje:
lEksperiment za odvajanje proteina u serumu pomoću celulozno-acetatne membrane
lCeluloza acetat membranska elektroforeza
lNekoliko razmatranja treba imati na umu kada koristite elektroforezu celulozno-acetatne membrane (1)
Ako imate plan kupovine za naše proizvode, slobodno nas kontaktirajte.Možete nam poslati poruku na email[email protected]ili[email protected], ili nas pozovite na +86 15810650221 ili dodajte Whatsapp +86 15810650221, ili Wechat: 15810650221.
referenca:Elektroforeza (Drugo izdanje) g. Li
Vrijeme objave: Jun-06-2023