Šta je elektroforeza u poliakrilamidnom gelu?

Poliakrilamidna gel elektroforeza

Gel elektroforeza je osnovna tehnika u laboratorijama u svim biološkim disciplinama, koja omogućava odvajanje makromolekula kao što su DNK, RNK i proteini. Različiti mediji i mehanizmi za razdvajanje omogućavaju da se podskupovi ovih molekula efikasnije odvajaju korišćenjem njihovih fizičkih karakteristika. Posebno za proteine, elektroforeza na poliakrilamidnom gelu (PAGE) je često tehnika izbora.

PAGE je tehnika koja razdvaja makromolekule kao što su proteini na osnovu njihove elektroforetske pokretljivosti, odnosno sposobnosti analita da se kreću prema elektrodi suprotnog naboja. U PAGE, ovo je određeno nabojem, veličinom (molekularnom težinom) i oblikom molekula. Analiti se kreću kroz pore formirane u poliakrilamidnom gelu. Za razliku od DNK i RNK, proteini variraju u naboju ovisno o ugrađenim aminokiselinama, što može utjecati na njihov rad. Nizovi aminokiselina mogu također formirati sekundarne strukture koje utiču na njihovu prividnu veličinu i posljedično na to kako se mogu kretati kroz pore. Stoga ponekad može biti poželjno denaturirati proteine ​​prije elektroforeze kako bi se linearizirali ako je potrebna preciznija procjena veličine.

SDS PAGE

Elektroforeza na natrijum-dodecil sulfatu u poliakrilamidnom gelu je tehnika koja se koristi za odvajanje proteinskih molekula mase od 5 do 250 kDa. Proteini se odvajaju isključivo na osnovu njihove molekularne težine. Natrijum dodecil sulfat, anjonski surfaktant, dodaje se u pripremu gelova koji maskira unutrašnje naboje proteinskih uzoraka i daje im sličan omjer naboja i mase. Jednostavnim riječima, denaturira proteine ​​i daje im negativan naboj.

Native PAGE

Native PAGE je tehnika koja koristi nedenaturirane gelove za odvajanje proteina. Za razliku od SDS PAGE, u pripremi gelova ne dodaje se denaturant. Kao rezultat toga, razdvajanje proteina se odvija na osnovu naboja i veličine proteina. U ovoj tehnici, konformacija, savijanje i lanci aminokiselina proteina su faktori o kojima zavisi razdvajanje. Proteini se u ovom procesu ne oštećuju i mogu se oporaviti nakon završetka odvajanja.

Kako radi elektroforeza u poliakrilamidnom gelu (PAGE)?

Osnovni princip PAGE je odvajanje analita propuštanjem kroz pore poliakrilamidnog gela pomoću električne struje. Da bi se to postiglo, mješavina akrilamid-bisakrilamida se polimerizira (poliakrilamid) dodatkom amonijum persulfata (APS). Reakcija, koju katalizira tetrametiletilendiamin (TEMED), formira mrežastu strukturu s porama kroz koje se analiti mogu kretati (slika 2). Što je veći procenat ukupnog akrilamida uključenog u gel, to je manja veličina pora, a samim tim i manji proteini koji će moći da prođu. Omjer akrilamida i bisakrilamida također će utjecati na veličinu pora, ali se često održava konstantnim. Manje veličine pora također smanjuju brzinu kojom se mali proteini mogu kretati kroz gel, poboljšavajući njihovu rezoluciju i sprječavajući ih da brzo otiču u pufer kada se primjenjuje struja.

Oprema za poliakrilamidnu gel elektroforezu

Ćelija za gel elektroforezu (rezervoar/komora)
Rezervoar za gel za elektroforezu u poliakrilamidnom gelu (PAGE) razlikuje se od rezervoara za agarozni gel. Spremnik za agarozni gel je horizontalan, dok je PAGE rezervoar okomit. Pomoću vertikalne ćelije za elektroforezu (rezervoar/komora), tanak gel (obično 1,0 mm ili 1,5 mm) se sipa između dvije staklene ploče i montira tako da je dno gela potopljeno u pufer u jednoj komori, a gornji dio u puferu u drugoj komori. Kada se primeni struja, mala količina pufera migrira kroz gel iz gornje komore u donju komoru. Sa jakim stezaljkama koje garantuju da sklop ostaje u uspravnom položaju, oprema omogućava brzi rad gela uz ravnomjerno hlađenje što rezultira različitim trakama.

Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. (Liuyi Biotechnology) proizvodi niz veličina ćelija za elektroforezu poliakrilamidnog gela (rezervoara/komora). Modeli DYCZ-20C i DYCZ-20G su ćelije za vertikalnu elektroforezu (rezervoari/komorije) za analizu sekvenciranja DNK. Neke od vertikalnih ćelija za elektroforezu (rezervoari/komora) su kompatibilne sa sistemom za upijanje, kao što su modeli DYCZ-24DN, DYCZ-25D i DYCZ-25E kompatibilni su sa Western Blotting sistemom modelima DYCZ-40D, DYCZ-40G i DYCZ-40F, koji se koriste za prijenos proteinske molekule sa gela na membranu. Nakon SDS-PAGE elektroforeze, Western Blotting je tehnika za otkrivanje specifičnog proteina u mješavini proteina. Ove sisteme za upijanje možete odabrati prema eksperimentalnim zahtjevima.

Napajanje za elektroforezu
Da biste osigurali električnu energiju za pokretanje gela, trebat će vam napajanje za elektroforezu. U Liuyi Biotechnology nudimo niz izvora napajanja za elektroforezu za sve primjene. Modeli DYY-12 i DYY-12C sa visokim stabilnim naponom i strujom mogu zadovoljiti zahtjeve elektroforeze visokog napona. Ima funkciju stajanja, mjerenja vremena, VH i primjene korak po korak. Idealni su za primjenu elektroforeze IEF i DNK sekvenciranja. Za opštu primenu elektroforeze proteina i DNK, imamo modele DYY-2C, DYY-6C, DYY-10 i tako dalje, koji su takođe prodajni izvori napajanja sa ćelijama za elektroforezu (rezervoari/komorije). Mogu se koristiti za srednje i niskonaponske elektroforezne aplikacije, kao što su školske laboratorije, bolničke laboratorije i tako dalje. Više modela za napajanje, posjetite našu web stranicu.

Liuyi brend ima više od 50-godišnju istoriju u Kini i kompanija može da obezbedi stabilne i visokokvalitetne proizvode širom sveta. Kroz godine razvoja, dostojan je vašeg izbora!

Za više informacija o nama, kontaktirajte nas putem e-pošte[email protected] or [email protected].

Reference za Šta je elektroforeza u poliakrilamidnom gelu?
1. Dr Karen Steward Elektroforeza na poliakrilamidnom gelu, kako radi, varijante tehnike i njene primjene