Uvod
Gel elektroforeza je osnovna tehnika u molekularnoj biologiji, koja se široko koristi za odvajanje proteina, nukleinskih kiselina i drugih makromolekula. Pravilna kontrola zapremine uzorka, napona i vremena elektroforeze je ključna za postizanje tačnih i ponovljivih rezultata.Naš laboratorijski kolega nudinajbolje prakse za upravljanje ovim parametrima tokom SDS-PAGE gel elektroforeze.
Beijing Liuyi Biotechnology proizvodi za gel elektroforezu
Volumen uzorka: osiguravanje konzistentnosti
Prilikom izvođenja SDS-PAGE elektroforeze, volumen uzorka je ključni faktor koji može značajno utjecati na rezoluciju vaših rezultata. Općenito se preporučuje ubaciti 10 µL ukupnog proteina po jažici. Da biste osigurali konzistentnost i spriječili difuziju uzorka između susjednih bunara, važno je u sve prazne jažice ubaciti jednaku zapreminu pufera za punjenje 1x. Ova mjera opreza pomaže u sprječavanju širenja uzoraka u susjedne trake, do čega može doći ako se bunar ostavi prazan.
Prije stavljanja uzoraka, uvijek počnite dodavanjem markera molekularne težine u jednu jažicu. Ovo omogućava laku identifikaciju veličina proteina nakon elektroforeze.
Kontrola napona: balansiranje brzine i rezolucije
Napon koji se primjenjuje tokom elektroforeze direktno utiče i na brzinu kojom uzorci migriraju kroz gel i na rezoluciju razdvajanja. Za SDS-PAGE, preporučljivo je započeti s niskim naponom od oko 80V. Ovaj početni nizak napon omogućava uzorcima da migriraju sporo i ravnomjerno, koncentrišući ih u oštru traku dok ulaze u gel za odvajanje.
Kada uzorci potpuno uđu u gel za odvajanje, napon se može povećati na 120V. Ovaj viši napon ubrzava migraciju, osiguravajući da se proteini efikasno razdvajaju prema njihovoj molekularnoj težini. Neophodno je pratiti napredak fronta boje bromofenol plave boje, što ukazuje na završetak elektroforeze. Za gelove sa koncentracijom od 10-12%, obično je dovoljno 80-90 minuta; međutim, za 15% gelove, možda ćete morati malo produžiti vrijeme trajanja.
Upravljanje vremenom: znati kada stati
Vrijeme je još jedan kritični faktor u gel elektroforezi. Predugo ili prekratko korištenje gela može dovesti do neoptimalnog odvajanja. Migracija bromofenol plave boje je koristan pokazatelj: kada dođe do dna gela, obično je vrijeme da se zaustavi trčanje. Za standardne gelove, kao što je 10-12%, obično je dovoljno trajanje elektroforeze od oko 80-90 minuta. Za gelove većeg procenta, poput 15%, vreme trajanja treba produžiti kako bi se osiguralo potpuno odvajanje proteina.
Upravljanje baferima: Ponovno korištenje i priprema pufera
Pufer za elektroforezu se može ponovo koristiti 1-2 puta, u zavisnosti od specifičnih uslova vaše laboratorije. Međutim, za optimalne rezultate preporučuje se pripremiti svježi 10x pufer i razrijediti ga neposredno prije upotrebe. Ovo osigurava da pufer zadrži svoju efikasnost, što dovodi do pouzdanijih rezultata elektroforeze.
Beijing Liuyi Biotechnology proizvodi za gel elektroforezu
Pažljivom kontrolom volumena uzorka, napona i vremena elektroforeze, možete značajno poboljšati točnost i ponovljivost rezultata vaše gel elektroforeze. Primjena ovih najboljih praksi u vašem laboratorijskom radu pomoći će vam da postignete jasnije i jasnije opsege, što će dovesti do boljih podataka za analizu nizvodno.
Ako imate više dobrih metoda za optimizaciju eksperimenta gel elektroforeze, dobrodošli da razgovarate s nama!
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) specijalizirao se za proizvodnju instrumenata za elektroforezu više od 50 godina s vlastitim profesionalnim tehničkim timom i R&D centrom. Imamo pouzdanu i kompletnu proizvodnu liniju od dizajna do inspekcije, skladište, kao i marketinšku podršku. Naši glavni proizvodi su ćelija za elektroforezu (rezervoar/komora), napajanje za elektroforezu, plavi LED transiluminator, UV transiluminator, sistem za gel slike i analizu itd. Takođe isporučujemo laboratorijske instrumente kao što su PCR instrument, vorteks mikser i centrifuga za laboratoriju.
Ako imate plan kupovine za naše proizvode, slobodno nas kontaktirajte. Možete nam poslati poruku na email[email protected]ili[email protected], ili nas pozovite na +86 15810650221 ili dodajte Whatsapp +86 15810650221, ili Wechat: 15810650221.
Skenirajte QR kod za dodavanje na Whatsapp ili WeChat.
Vrijeme objave: 20.08.2024