Eksperiment za odvajanje proteina u serumu elektroforezom celulozno-acetatne membrane

Princip

Elektroforeza celuloznog acetatnog filma je metoda elektroforeze koja koristi celulozno acetatni film kao podlogu. Fenomen u kojem se nabijene čestice kreću prema suprotnoj elektrodi pod djelovanjem električnog polja naziva se elektroforeza. Budući da svaki protein ima specifičnu izoelektričnu tačku, ako se protein stavi u otopinu s pH nižom od njegove izoelektrične točke, protein će biti pozitivno nabijen i kretati se prema negativnoj elektrodi. Naprotiv, kreće se na pozitivan pol. Budući da je brzina proteinskih molekula koje se kreću u električnom polju povezana s njihovim nabojem, oblikom i veličinom molekula, različiti proteini se mogu razdvojiti elektroforezom. Serum sadrži razne proteine, od kojih svi imaju izoelektrične tačke na pH 7,5 ili manje. Kada se serum stavi u pufer pH 8,6 kako bi se pokrenula elektroforeza, svi proteini seruma su negativno nabijeni i kretat će se prema pozitivnoj strani u električnom polju. Budući da različiti proteini u serumu imaju različit naboj pri istom pH, molekularne čestice su različite veličine, a samim tim i brzina migracije je različita, a razdvoje se elektroforezom. Izoelektrične tačke i molekularne težine serumskih proteina prikazane su u tabeli ispod:

Eksperiment je da se razdvoje različiti proteini u krvnom serumu sa celulozno acetatnom membranom (skraćeno CAM) kao podlogom. CAM je vrsta pjenastih toaletaefilm sa dobrom ujednačenošću, a debljina je 0,1 mm-1,5 mm, koji ima određenu apsorpciju vode.

Materijali, instrumenti i reagensi za CAM elektroforezu

Uzorci:zdravog ljudskog krvnog seruma

instrument:napajanje DYY-6C, rezervoar za elektroforezu DYCP-38C, vrhunsko punjenje uzorka WD-9404

Reagensi

1) celulozno acetatna membrana 7X9cm

2) PH 8,6 barbitol puferski rastvor (jonska jačina 0,05-0,09, vreme je 0,06 tid.): uzmite 1,84 g dietil barbiturne kiseline, a zatim uzmite 1,03 g dietil natrijum pentobarbitala, dodajte malo destilovane vode da se zagreje da se rastvori i napravite do 1000 ml;

3) Mrlja: Ponceau S 0,2g, Trihlorosirćetna 3g, dodati 100ml destilovane vode;

4) TBS/T ili PBS/T: 45ml 95% etanola, 5ml glacijalne sirćetne kiseline, dodati 50ml destilovane vode;

5) Rastvor za čišćenje: 70 ml bezvodnog etanola, 30 ml glacijalne sirćetne kiseline.

Experiment Method

1) Pripremite membranu: Uronite membranu u rastvor barbitol pufera 30 min-8h, izvadite je, uklonite višak rastvora upijajućim papirom.

2) Ubacivanje uzoraka: Razlikujte hrapavu stranu i glatku stranu membrane i označite liniju na udaljenosti od 1,5 cm od gornjeg kraja na hrapavoj strani. Ubacite uzorke vrhunskim alatom za ubacivanje uzoraka na grubu stranu. Napomena: Uzorke treba staviti na grubu stranu membrane. Nakon što su uzorci seruma potpuno prodrli u membranu, preokrenuti membranu, grubu stranu (sa uzorcima) staviti licem nadole prema rezervoaru, a kraj sa uzorcima staviti u negativnu elektrodu.

3) Elektroforeza: Uključite napajanje, 0,4～0,6m A/cm membrane, vrijeme rada je 30-45 min. Nakon pokretanja elektroforeze, isključite napajanje.

4) Mrljanje i čišćenje: Izvadite membranu iz rezervoara i uroniteit u rastvor boje na 5 minuta, a zatim ga čistite u rastvoru za čišćenje iznova i iznova 3-4 puta dok boja pozadine ne postane bistra. Proteini seruma treba da budu prikazani na trakama, a normalno postoji pet zona, koje čine gornji kraj do označene linije, albumin, α1-gloulin, α2-gloulin, β-gloulin, γ-gloulin.

5) Konzerviranje: staviti suvu elektroforezubendu rastvoru za čišćenje 10-15 minuta, a zatim ga izvadite i zalijepite na čisto staklo, nakon što se osuši, postaće proziran filmbend.

EksperimentirajRezultat

Efekat razdvajanja uzoraka seruma je dobar i nema fenomena opadanja trake. Ponovljivost rezultata varira zbog postupaka ispitivanja i metoda eksperimentatora, a ponovljivost je visoka.

Zaključak

Brzi sistem detekcije kliničke elektroforeze (Spremnik za elektroforezuDYCP-38C,napajanjeDYY-6C i vrhunsko punjenje uzorka WD-9404) proizveden od strane našekompanija Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltdispunjava eksperimentalne zahtjeve,irezultati su ponovljivi, jednostavni i brzi, pogodni zanastaveistraživanja.

Beijing LiuyiBiotechnology Co., Ltd je specijalizovana za proizvodnju proizvoda za elektroforezu za industriju nauke o životu, kojaima više od 50-godišnju istoriju u Kini i kompanija može da obezbedi stabilne i visokokvalitetne proizvode širom sveta. Kroz godine razvoja, dostojan je vašeg izbora!

Sada smo u potrazi za partnerima, i OEM rezervoar za elektroforezu i distributeri su dobrodošli.

Za više informacija o nama, kontaktirajte nas putem e-pošte[email protected]ili[email protected].