Comet Assay: osjetljiva tehnika za otkrivanje oštećenja i popravke DNK

Comet Assay (single Cell Gel Electrophoresis, SCGE) je osjetljiva i brza tehnika koja se prvenstveno koristi za otkrivanje oštećenja i popravke DNK u pojedinačnim stanicama. Naziv "Comet Assay" dolazi od karakterističnog oblika komete koji se pojavljuje u rezultatima: jezgro ćelije formira "glavu", dok oštećeni fragmenti DNK migriraju, stvarajući "rep" koji podsjeća na kometu.

Princip

Princip Comet Assay-a zasniva se na migraciji fragmenata DNK u električnom polju. Netaknuta DNK ostaje unutar ćelijskog jezgra, dok oštećena ili fragmentirana DNK migrira prema anodi, formirajući "rep" komete. Dužina i intenzitet repa direktno su proporcionalni opsegu oštećenja DNK.

Procedura

1. Cell Preparation: Ćelije koje se testiraju se pomešaju sa agarozom niske tačke topljenja i rašire na mikroskopskim predmetima da bi se formirao jednolični sloj.
2. Cell Lysis: Stakalca se uranjaju u otopinu za lizu kako bi se uklonila ćelijska membrana i nuklearna membrana, otkrivajući DNK.
3. Elektroforeza: Stakalca se stavljaju u komoru za elektroforezu u alkalnim ili neutralnim uslovima. Oštećeni fragmenti DNK migriraju prema pozitivnoj elektrodi pod uticajem električnog polja.
4. Bojenje: Nakon elektroforeze, stakalca su obojena fluorescentnom bojom (npr. etidijum bromidom) da bi se vizualizovala DNK.
5. Microscopic Analysis: Koristeći fluorescentni mikroskop ili specijalizovani softver, analiziraju se oblici komete i mjere se parametri kao što su dužina repa i intenzitet.

Slika sa biorendera

Analiza podataka

Rezultati Comet Assay-a se procjenjuju na osnovu nekoliko ključnih parametara:

• Dužina repa: Predstavlja udaljenost na kojoj DNK migrira, što ukazuje na stepen oštećenja DNK.
• Sadržaj repne DNK: Procenat DNK koji migrira u rep, često se koristi kao kvantitativna mjera oštećenja DNK.
• Moment maslinovog repa (OTM): Kombinira dužinu repa i sadržaj repa DNK kako bi se pružila sveobuhvatnija mjera oštećenja DNK.

Prijave

1. Genotoxicity Studies: Comet Assay se široko koristi za procjenu efekata hemikalija, lijekova i zračenja na ćelijsku DNK, što ga čini ključnim alatom za testiranje genotoksičnosti.
2. Environmental Toxicology: Pomaže u analizi uticaja zagađivača životne sredine na DNK organizama, pružajući uvid u bezbednost ekosistema.
3. Medicinska i klinička istraživanja: Comet Assay se koristi u proučavanju mehanizama popravke DNK, raka i drugih bolesti povezanih s DNK. Također procjenjuje utjecaj terapija raka kao što su radioterapija i kemoterapija na DNK.
4. Prehrambene i poljoprivredne nauke: Koristi se za procjenu sigurnosti pesticida, aditiva u hrani i drugih supstanci i za proučavanje njihovih toksičnih efekata na životinjskim modelima.

Prednosti

• Visoka osjetljivost: Sposoban za otkrivanje niske razine oštećenja DNK.
• Jednostavna operacija: Tehnika je jednostavna, što je čini pogodnom za skrining visoke propusnosti.
• Široka primjena: Može se primijeniti na različite tipove stanica, uključujući životinjske i biljne ćelije.
• Izazovi kvantifikacije: Dok pruža kvalitativne podatke o oštećenju DNK, kvantitativna analiza se u velikoj mjeri oslanja na softver i tehnike analize slika.
• Eksperimentalni uslovi: Na rezultate mogu uticati faktori kao što su vreme elektroforeze i pH, što zahteva pažljivu kontrolu eksperimentalnih uslova.

Ograničenja

Comet Assay je neprocjenjiv alat u biomedicinskim istraživanjima, nauci o okolišu i razvoju lijekova zbog svoje fleksibilnosti i visoke osjetljivosti u otkrivanju oštećenja i popravke DNK. Peking Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology)nudi horizontalnu komoru za elektroforezu za ispitivanje kometa. Dobrodošli da nas kontaktirate kako bismo razgovarali oComet Assayprotokol.

Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) specijalizirao se za proizvodnju instrumenata za elektroforezu više od 50 godina s vlastitim profesionalnim tehničkim timom i R&D centrom. Imamo pouzdanu i kompletnu proizvodnu liniju od dizajna do inspekcije, skladište, kao i marketinšku podršku. Naši glavni proizvodi su ćelija za elektroforezu (rezervoar/komora), napajanje za elektroforezu, plavi LED transiluminator, UV transiluminator, sistem za gel slike i analizu itd. Takođe isporučujemo laboratorijske instrumente kao što su PCR instrument, vorteks mikser i centrifuga za laboratoriju.

Ako imate plan kupovine za naše proizvode, slobodno nas kontaktirajte. Možete nam poslati poruku na email[email protected]ili[email protected], ili nas pozovite na +86 15810650221 ili dodajte Whatsapp +86 15810650221, ili Wechat: 15810650221.

Skenirajte QR kod za dodavanje na Whatsapp ili WeChat.