Priprema uzorka iLoading
Zbog upotrebe kontinuiranog puferskog sistema bez gela za slaganje u većini slučajeva, uzorci bi trebali imati odgovarajuću koncentraciju i mali volumen. Koristite apipetapolako dodavati uzorak, sa 5-10 μg po jažici, kako bi se izbjeglo značajno smanjenje rezolucije. Kadaučitavanje uzorka, napajanje mora biti isključeno. Uzorak treba da sadrži indikatorsku boju (0,025% bromofenol plava ili narandžasta) i saharozu (10-15%) ili glicerol (5-10%) kako bi se povećala njegova gustina, koncentrirao uzorak i spriječila difuzija. Međutim, ponekad saharoza ili glicerol mogu uzrokovati trake u obliku slova U u rezultatima elektroforeze, što se može izbjeći upotrebom 2,5% Ficoll-a (polivinilpirolidon).
Elektroforeza
Napon za elektroforezu je 5-15 V/cm, uglavnom oko 10 V/cm. Za odvajanje velikih molekula, napon bi trebao biti niži, obično ne veći od 5 V/cm.
Bojenje
Fluorescentna boja etidijev bromid (EB) se obično koristi za bojenje da bi se uočile DNK trake u agaroznom gelu. EB može umetnuti između parova baza molekula DNK, uzrokujući da se EB veže za DNK. Apsorpcija 260 nm ultraljubičastog svjetla od strane DNK se prenosi na EB, a vezani EB emituje fluorescenciju na 590 nm u crveno-narandžastom području spektra vidljive svjetlosti. Bojenje gela u otopini 1 mmol/L MgSO4 u trajanju od 1 sata može smanjiti pozadinsku fluorescenciju uzrokovanu nevezanim EB, olakšavajući detekciju malih količina DNK.
EB boja ima nekoliko prednosti: laka je za upotrebu, ne razbija nukleinske kiseline, ima visoku osjetljivost i može obojiti i DNK i RNK. EB se može dodati uzorku i pratiti korištenjem UV apsorpcije u bilo koje vrijeme. Nakon bojenja, EB se može ukloniti ekstrakcijom n-butanolom.
Međutim, EB boja je moćan mutagen i potrebno je poduzeti mjere opreza, kao što je nošenje polietilenskih rukavica tokom rukovanja. Akridin narandžasta je također često korištena boja jer može razlikovati jednolančane i dvolančane nukleinske kiseline (DNK, RNA). Pokazuje zelenu fluorescenciju (530 nm) za dvolančane nukleinske kiseline i crvenu fluorescenciju (640 nm) za jednolančane nukleinske kiseline. Dodatno, druge boje kao što su metilen plavo, metilen zeleno i kinolin B mogu se koristiti za bojenje.
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) specijalizirao se za proizvodnju instrumenata za elektroforezu više od 50 godina s vlastitim profesionalnim tehničkim timom i R&D centrom. Imamo pouzdanu i kompletnu proizvodnu liniju od dizajna do inspekcije, skladište, kao i marketinšku podršku. Naši glavni proizvodi su ćelija za elektroforezu (rezervoar/komora), napajanje za elektroforezu, plavi LED transiluminator, UV transiluminator, sistem za analizu gela i slike itd.
Sada smo u potrazi za partnerima, i OEM rezervoar za elektroforezu i distributeri su dobrodošli.
Ako imate plan kupovine za naše proizvode, slobodno nas kontaktirajte. Možete nam poslati poruku na email[email protected]ili[email protected], ili nas pozovite na +86 15810650221 ili dodajte Whatsapp +86 15810650221, ili Wechat: 15810650221.
Skenirajte QR kod za dodavanje na Whatsapp ili WeChat.
Vrijeme objave: 20.12.2023