1. Klasifikacija
Gel elektroforeza je podijeljena na vertikalne tipove (uključujući kolonske gelove i gelove u obliku ploča) i horizontalne tipove (uglavnom pločaste gelove) (Slika 6-18). Općenito, vertikalno razdvajanje je nešto bolje od horizontalnog, ali horizontalna priprema gela ima najmanje četiri prednosti: postoji potpora ispod cijelog gela, što omogućava upotrebu agaroze niske koncentracije; moguće je pripremiti ploče od agaroznog gela različitih specifikacija; priprema gela i punjenje uzorka su praktičniji; komora za elektroforezu je jednostavna za konstrukciju i isplativa. Budući da se horizontalna elektroforeza izvodi sa pločom agaroznog gela potpuno potopljenom oko 1 mm ispod površine pufera za elektroforezu, naziva se i potopljena elektroforeza.
Spremnik za elektroforezu DYCP-31DN za elektroforezu u agaroznom gelu
2.Buffer System
Kod odvajanja nukleinskih kiselina, većina sistema usvaja kontinuirane sisteme. Uobičajeni puferi za elektroforezu uključuju TBE (0,08mol/L Tris·HCl, pH 8,5, 0,08mol/L borne kiseline, 0,0024mol/L EDTA) pufer i THE (0,04mol/L Tris·HCl, pH 7,8, 0,02mol/L natrijum acetat, 0,0018 mol/L EDTA) pufer. Ovi puferi se općenito pripremaju kao 10x temeljne otopine i razrjeđuju se do potrebne koncentracije kada se koriste. Stope migracije linearne i kružne DNK u agaroznom gelu variraju u zavisnosti od pufera koji se koristi. U puferu THE, brzina migracije linearne DNK je veća od one kružne DNK, dok je u TBE puferu obrnuto.
3. Priprema agaroznog gela
(1) Priprema horizontalnog agaroznog gela
(a) Pripremite potrebnu koncentraciju agaroznog gela koristeći 1x pufer za elektroforezu.
(b) Zagrijati agarozu do potpunog rastvaranja ili u kipućoj vodenoj kupelji, na magnetnoj miješalici ili u mikrovalnoj pećnici. Ohladite otopinu agaroze na 55°C i dodajte etidijev bromid (EB) boju do konačne koncentracije od 0,5 μg/ml.
(c) Zapečatite ivice staklenih ili akrilnih ploča sa malom količinom agaroznog gela, dodajte češalj i postavite zupce češlja oko 0,5~1,0 mm iznad ploče.
(d) Otopljeni rastvor gela agaroze kontinuirano sipajte u kalup za staklo ili akrilnu ploču (debljina zavisi od zapremine uzorka DNK), izbegavajući unošenje vazdušnih mehurića. Ostavite da se prirodno stvrdne na sobnoj temperaturi.
(e) Pažljivo uklonite češalj nakon potpunog stvrdnjavanja. Dodajte odgovarajuću količinu pufera za elektroforezu u rezervoar za gel, pazeći da je gel ploča potopljena oko 1 mm ispod površine pufera za elektroforezu.
(2) Priprema vertikalnog agaroznog gela
(a) Uklonite masnoću ili ostatke sa staklenih ploča ispiranjem etanolom.
(b) Postavite odstojne ploče između prednje i zadnje brane, poravnajte ivice odstojnih ploča sa prednjom i zadnjom branom i pričvrstite ih stezaljkama.
(c) Dodajte 2% agaroze u 1x pufer između ivica odstojnih ploča da biste formirali 1 cm visok agarozni čep na dnu komore za livenje gela.
(d) Sipajte otopljeni gel agaroze u željenoj koncentraciji, pripremljen u 1x puferu, u komoru za gel do 1 cm ispod vrha.
(e) Umetnite češalj, izbjegavajući zarobljavanje mjehurića zraka ispod zubaca češlja. Ponekad se tokom hlađenja agaroznog gela mogu pojaviti bore na zubima češlja; u takvim slučajevima jednostavno dodajte malo otopljene agaroze na vrh da se učvrsti.
(f) Uklonite češalj. Da biste spriječili curenje pufera u otvoru za punjenje, zatvorite vezu između ploče agaroznog gela i komore za elektroforezu sa 2% agaroze i dodajte potrebnu količinu pufera.
(g) Dodajte 1x pufer za elektroforezu u komoru za gel.
(h) Pažljivo ubacite uzorke DNK na agarozni gel ispod pufera.
Više informacija o osnovnim znanjima o elektroforezi u agaroznom gelu podijelit ćemo sljedeće sedmice. Želimo da ove informacije budu od pomoći vašem eksperimentu.
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) specijalizirao se za proizvodnju instrumenata za elektroforezu više od 50 godina s vlastitim profesionalnim tehničkim timom i R&D centrom. Imamo pouzdanu i kompletnu proizvodnu liniju od dizajna do inspekcije, skladište, kao i marketinšku podršku. Naši glavni proizvodi su ćelija za elektroforezu (rezervoar/komora), napajanje za elektroforezu, plavi LED transiluminator, UV transiluminator, sistem za analizu gela i slike itd.
Sada smo u potrazi za partnerima, i OEM rezervoar za elektroforezu i distributeri su dobrodošli.
Ako imate plan kupovine za naše proizvode, slobodno nas kontaktirajte. Možete nam poslati poruku na email[email protected]ili[email protected], ili nas pozovite na +86 15810650221 ili dodajte Whatsapp +86 15810650221, ili Wechat: 15810650221.
Skenirajte QR kod za dodavanje na Whatsapp ili WeChat.
Vrijeme objave: Dec-07-2023